《陛下皇后又动手了》围绕傲娇皇帝和霸气皇后展开。皇帝表面威严，实则内心戏丰富，总想着打压皇后的气焰；皇后性格直爽，行事果断，不把皇帝的威严放在眼里。两人日常就是斗嘴、互怼、搞小动作。有一次，皇帝故意在早朝上提出一些刁钻政策想让皇后出丑，皇后却巧妙化解还反将一军。还有一回，皇后举办赏花宴，皇帝想捣乱，结果被皇后设计弄得十分狼狈。然而，在一次次的交锋中，他们逐渐发现对方身上的闪光点，感情也在不知不觉中发生了变化，从互相较劲到暗生情愫，上演了一段又甜又逗趣的宫廷爱情故事。