《铁道飞虎》以抗日战争为背景，围绕着铁道工人们展开。主角马原是火车站的搬运工，他带领着老铁、大奎、小裁缝等一帮兄弟，凭借对铁路线的熟悉，开始了与日军的周旋斗争。他们时常趁日军不备，抢夺物资、破坏铁轨，让日军头疼不已。一次偶然的机会，他们救下了受日军追杀的八路军女战士，得知了日军正在秘密运输一批重要军火。为了阻止这批军火运往前线，铁道飞虎队与八路军紧密配合。他们巧妙地利用火车、地形等条件，与装备精良的日军展开了一场惊险刺激的战斗，最终成功炸毁了军火列车，为抗战贡献了自己的力量。