影片主角是来自布鲁克林的少年迈尔斯·莫拉莱斯，他在一次意外中被一只放射性蜘蛛咬伤，从而获得了蜘蛛侠的超能力。然而，迈尔斯还没完全掌握能力，就遭遇了多元宇宙的危机。邪恶的金并建造了一台可以打通平行宇宙通道的对撞机，导致不同宇宙的蜘蛛侠们被吸入迈尔斯所在的宇宙。其中包括彼得·帕克、女蜘蛛侠格温、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠等。迈尔斯与这些来自不同宇宙的蜘蛛侠们相遇后，他们一起对抗金并及其手下。在这个过程中，迈尔斯不断成长，逐渐学会掌控自己的能力，最终和伙伴们成功阻止了金并的阴谋，拯救了多个宇宙。